bcr/abl融合基因bcr/abl融合基因检测

发布网友 发布时间：2024-10-23 20:56

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热心网友 时间：2024-11-01 04:09

BCR/ABL融合基因检测是诊断及监测慢性髓性白血病(CML)的重要手段。它主要通过分子生物学技术来检测该融合基因是否存在。本文将详细介绍三种主要的检测方法：Southern Blot、RT-PCR和实时定量PCR。

首先，Southern Blot技术通过*性内切酶酶切及琼脂糖电泳，将DN*段转移到固相杂交膜上进行检测。如果细胞DNA中发生过基因重排，酶切位点的变化会导致产生不同于胚系DNA的酶切片段。在白血病患者的白细胞基因组DNA中，通常可见到一条与胚系bcr基因组DNA相对应的条带，其他条带则说明存在重排的bcr等位基因。

其次，RT-PCR技术通过异硫氢酸胍酚、氯仿一步法提取细胞总RNA，然后设计两对引物进行逆转录反应合成cDNA，并进行PCR扩增。取扩增后的产物进行电泳检测，通过观察结果来判断是否存在bcr-abl基因接合区的mRNA。这种方法对于CML的检测既敏感又特异。

最后，实时定量PCR技术在PCR扩增时加入一对引物和一个特异性的荧光探针。荧光探针两端分别标记报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。Taq酶的5’～3’外切酶活性将探针酶切降解，从而释放荧光信号。每个模板的Ct值与起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。通过标准曲线计算得出样本的起始拷贝数。

此外，BCR/ABL融合基因编码的蛋白P210也可以通过Western印迹或酶联免疫反应进行检测。这种方法提供了另一种检测融合蛋白的途径，对CML的诊断和监测具有重要意义。

慢性粒细胞白血病（Chronic Myelognous Leukemia,CML）是一种发生于造血干细胞的血液系统恶性克隆增生性疾病。在受累的细胞系中可找到Ph标记染色体或（和）bcr/abl基因重排。