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生物PCR引物设计 5‘端富集GC 3’端少GC而且以T结尾 这样对吗 谢谢?

发布网友 发布时间:8小时前

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3个回答

热心网友 时间:4小时前

这样还不错。5‘段增加稳定性,3’端最好不要有太多的GC,一般来说,最后5个碱基里不要出现超过2-3个G或者C。因为3‘端是扩增的关键,一旦出现3’端的错配或者二聚体,因为GC配对是较为牢固的,是难以解开的。就可能会造成非特异扩展。
但是我建议最后一个如果可以的话以G、C结尾。
其实以我的经验,设计引物的那些原则可以不要太讲究,毕竟能跑出来才是硬道理。跑得漂亮自然更好。对于有些复杂区域,本来就很难设计引物,勉强也在所难免。

热心网友 时间:4小时前

最好以T结尾 不是一定 选打分高的。。。

热心网友 时间:4小时前

对的,这样设计结合率高,PCR容易成功。但不一定非得按这个来,因为同时还得考虑其他因素,如错配,发卡结构,假阳性等,综合考虑选最优的。
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