曲克芦丁片微生物限度检查法验证

曲 克 芦 丁 片

微生物限度检查法验证方案

起 草 人： 年 月 日

审 核 人： 年 月 日

批准日期： 年 月 日

xxxx制药有限公司 实施日期： 年 月 日

目 录

一、目的 二、依据 三、范围

四、验证小组成员及分工 五、验证方式 六、验证步骤

一、目的：

建立微生物限度检查法验证方案，以确认所采用的方法是否适合于曲克芦丁片的检查。 二、依据：

国家药品监督管理局《药品生产质量管理规范》(2010年修订)、《中国药典》20xx年版二部药品质量分析方法验证指导原则。 三、范围：

适用于本公司微生物限度检查法对曲克芦丁片的适用性 。 四、验证小组成员及分工： 姓名 所在部门 分 工 五、验证方式： 验证 六、验证步骤：

（一）细菌、霉菌与酵母菌计数方法的验证

建立药品的微生物限度检查法，进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。对各试验菌的回收率应注意进行验证。

1、验证用菌株 大肠杆菌（Escherichia）[CMCC(B)44 102]，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 〔CMCC(B) 63 501〕，白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕，黑

曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F)98 003〕。

2、菌液 接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能滤过菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。

3、验证方法 验证试验分四组，至少应进行在3次独立的平行试验，并分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。

⑴ 试验组 平皿法计数，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按菌落记数法测定其菌数。

⑵ 菌液组 取上述试验菌液,测定所加的试验菌数。

⑶ 供试品对照组 取最低稀释级供试液1ml，按菌落计数方法测定所含菌数。 ⑷ 稀释剂对照组 为考察供试液制备过程中微生物受影响的程度，用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终浓度为每1ml供试液含50～100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。

试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数

试验组的菌回收率(%)=--------------------------------------×100% 菌液组平均菌落数

稀释剂对照组平均菌落数

稀释剂对照组的菌回收率（% ）=--------------------------×100% 菌液组平均菌落数

4、结果判断 在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（应均不低于70%。若试验组的菌回收率均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法进行验证，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。 （二）大肠埃希菌的验证

1、菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]

2、菌液制备 接种大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfude菌悬液。 3、验证方法

（1）试验组 取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中，以大肠埃希菌检查法进行检查。

（2）阴性菌对照组 设立阴性菌对照组是为了验证大肠埃希菌检查方法的专属性。方法同试验组，验证时的阴性对照组采用金黄色葡萄球菌；阴性对照菌不得检出。

4、结果判断 阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和大肠埃希菌检查法进行供试品的大肠埃希菌检查；若试验组未检出试验菌，应建立新的方法进行验证，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。