搜索
您的当前位置:首页过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

时间:2020-02-04 来源:乌哈旅游
北京索莱宝科技有限公司过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号:BC0200规格:50T/48S产品内容:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体100μL×3瓶,4℃保存。产品说明:CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤:一、粗酶液提取:1、细菌、细胞或组织样品的制备细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10个):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(功率20%或200w,超声3秒,间隔10秒。重复30次);8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。2、血清(浆)样品:直接检测。4

第1页共3页北京索莱宝科技有限公司二、CAT测定操作1、分光光度计预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。2、CAT检测工作液的配置:用时在每瓶试剂二(100μL)中加入20ml试剂一,充分混匀,作为工作液;用不完的试剂4℃保存一周。3、测定前将CAT检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴10min。4、取1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀5s;室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2。三、CAT活性计算:1、血清(浆)CAT活力的计算:单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷V样÷T=678×ΔA2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:(1)按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷(V样×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr(2)按样本鲜重计算:单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷(W×V样÷V样总)÷T=678×ΔA÷W3、按细菌或细胞中CAT活力计算:单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.356×ΔAV反总:反应体系总体积,1.035×10-3L;d:比色皿光径,1cm;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g;ε:H2O2摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cm;V样:加入样本体积,0.035mL;T:反应时间,1min。Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;9

9

9

第2页共3页北京索莱宝科技有限公司500:细胞或细菌总数,500万;10:单位换算系数,1mol=10nmol。99

第3页共3页

因篇幅问题不能全部显示,请点此查看更多更全内容

Top