第1页共3页北京索莱宝科技有限公司二、CAT测定操作1、分光光度计预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。2、CAT检测工作液的配置:用时在每瓶试剂二(100μL)中加入20ml试剂一,充分混匀,作为工作液;用不完的试剂4℃保存一周。3、测定前将CAT检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴10min。4、取1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀5s;室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2。三、CAT活性计算:1、血清(浆)CAT活力的计算:单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷V样÷T=678×ΔA2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:(1)按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷(V样×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr(2)按样本鲜重计算:单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10]÷(W×V样÷V样总)÷T=678×ΔA÷W3、按细菌或细胞中CAT活力计算:单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.356×ΔAV反总:反应体系总体积,1.035×10-3L;d:比色皿光径,1cm;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g;ε:H2O2摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cm;V样:加入样本体积,0.035mL;T:反应时间,1min。Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;9
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第2页共3页北京索莱宝科技有限公司500:细胞或细菌总数,500万;10:单位换算系数,1mol=10nmol。99
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