Expi293™ Expression Medium Opti-MEM. I Reduced-Serum Medium ExpiFectamine™ 293 Reagent
Expi293F™ Cells传代及冻存：
特点：适合高浓度悬浮生长（3–5 ×106cells/mL）
培养基：Expi293™ Expression Medium（避光保存，已有GlutaMAX™-I，故不需要再添加L-glutamine），使用前预热。
倍增时间：24hours
传代条件：当细胞长到3–5 ×106cells/mL时（3–4天），需进行传代，将细胞终浓度调到0.3–0.5 ×106 cells/mL。
冻存：冻存终浓度1×107cells/mL
冻存液由90% Expi293™ Expression Medium、10%DMSO组成。
Expi293F™ Cells转染：
进行转染实验前，Expi293F™ Cells复苏后最少传代三次，以恢复其活性; 为了有较高的转染效率，培养浓度维持在3–5 ×106cells/mL， 在使用前，ExpiFectamine™ 293 Reagent应用枪轻柔地将混匀
Protocol： Expi293F™ Cells传代培养3代；预热ExpiFectamine™ 293 Reagent
↓将7.5×107cells加到27ml的培养液中(转染终浓度2.5 ×106cells/mL) ↓准备两个离心管A、B
↓在A中加入Opti-MEM®、质粒30ug，终体积1.5ml，轻柔混匀
↓在B中加入Opti-MEM®、ExpiFectamine™ 81 μL，终体积1.5ml，轻柔混匀，室温孵育5min ↓把A液加入到B液中，轻柔混匀 ↓室温静置20min
↓将3ml的A/B混合液逐滴加入到27ml的细胞培养液中，同时倾斜混匀 ↓孵箱培养
说明书中的转染条件Transfection Conditions for Expi293F™ Cells
“For each 30-mL transfection, use 7.5 ×107 cells in 25.5 mL of Expi293™ Expression Medium. Scale your transfections up or down by proportionately adjusting the amounts of the reagents used.
Eg： Final transfection volume: 30 mL cells/mL)
Amount of plasmid DNA: 30 μg. Use 1 μg of DNA for every mL of transfection reaction.
Amount of ExpiFectamine™ 293 Reagent: 81 μL. Use 2.7 μL ExpiFectamine™ 293 Reagent per 1 μg
of plasmid DNA transfected.“
Number of cells to transfect: 7.5 × 107 cells with >95% viability (final cell density of 2.5 × 106
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